技术知识
微生物菌种保存方法--80℃冰箱冻结法
将菌种保藏在-80℃冰箱中以减缓细胞的生理活动进行冷冻的一种保藏方法。 操作步骤如下：1.安瓿管的准备安瓿管材料以中性玻璃为宜。清洗安瓿管时，先用2%盐酸浸泡过夜，自来水冲洗干净后，用蒸馏水浸泡至pH中性，干燥后、贴上标签，标上菌号及时间，加入脱脂棉塞后，121℃下高压灭菌15-20分钟，备用。 2.保护剂的选择和准备保护剂种类要根据微生物类别选择。配制保护剂时，应注意其浓度及pH值，以及灭菌方法
定期移植法微生物菌种保存方法-定期移植法
亦称传代培养保藏法，包括斜面培养、穿刺培养、液体培养等。是指将菌种接种于适宜的培养基中，最适条件下培养，待生长充分后，于4～6℃进行保存并间隔时间进行移植培养的菌种保藏方法。 操作步骤如下：1.培养基制备 ①器皿准备培养基制备过程中所用的一些玻璃器皿，如三角瓶、试管、培养皿、烧杯、吸管等，经洗涤、干燥、包装、灭菌后使用。 ②溶解培养基配料先在烧杯中放适量水，按培养基配方称取各项材料，依次将缓冲化合
微生物菌种保存方法-沙土管法
是载体保藏法的一种。将培养好的微生物细胞或孢子用无菌水制成悬浮液,注入灭菌的沙土管中混合均匀，或直接将成熟孢子刮下接种于灭菌的沙土管中，使微生物细胞或孢子吸附在沙土载体上，将管中水分抽干后熔封管口或置干燥器中于4～6℃或室温进行保存的一种菌种保藏方法。 操作步骤如下：1.沙土管制备将河沙用60目过筛，弃去大颗粒及杂质，再用80目过筛，去掉细沙。用吸铁石吸去铁质，放入容器中用10%盐酸浸泡，如河沙中
微生物菌种保存方法-液氮超低温冻结法
液氮超低温保藏技术是将菌种保藏在-196℃的液态氮，或在-150℃的氮气中的长期保藏方法，它的原理是利用微生物在-130℃以下代谢趋于停止而有效地保藏微生物。 操作步骤如下：1.安瓿管或冻存管的准备用圆底硼硅玻璃制品的安瓿管，或螺旋口的塑料冻存管。注意玻璃管不能有裂纹。将冻存管或安瓿管清洗干净， 121℃下高压灭菌15-20分钟，备用。 2.保护剂的准备保护剂种类要根据微生物类别选择。配制保护剂时
微生物菌种保存方法-液体石蜡法
亦称矿物油保藏法,定期移植保藏法的辅助方法。是指将菌种接种在适宜的斜面培养基上，适宜条件下培养至菌种长出健壮菌落后注入灭菌的液体石蜡，使其覆盖整个斜面，再直立放置于低温（4～6℃）干燥处进行保存的一种菌种保藏方法。 操作步骤如下： 1.液体石蜡的准备选用优良化学纯液体石蜡，将液体石蜡分装加塞，用牛皮纸包好，采用以下两种方式进行灭菌：121℃湿热灭菌30min，置40℃恒温箱中蒸发水分，经无菌检查后
微生物菌种保存方法-真空冷冻干燥法
将微生物冷冻，在减压下利用升华作用除去水分，使细胞的生理活动趋于停止，从而长期维持存活状态。 操作步骤如下： 好氧菌冷冻干燥管的制备1.安瓿管准备安瓿管材料以中性玻璃为宜。清洗安瓿管时，先用2%盐酸浸泡过夜，自来水冲洗干净后，用蒸馏水浸泡至pH中性，干燥后、贴上标签，标上菌号及时间，加入脱脂棉塞后，121℃下高压灭菌15-20分钟，备用。 2.保护剂的选择和准备保护剂种类要根据微生物类别选择。配制
微生物菌种衰退的原因
微生物长期受到外界的影响，遗传性状必然发生某些变异。正是由于变异的存在才使得生物向前进化。然而由于突变的存在，菌种在培养或保藏过程中，可能会出现某些优良生产性状的劣化、遗传标记丢失、典型特征改变等现象，称为菌种衰退。比如苏云金芽孢杆菌由于菌种衰退，导致其新生的菌体芽孢和伴孢晶体都比较小；保藏的沙门氏菌鞭毛抗原丢失，导致H多价血清不凝固等。菌种衰退的根本原因是有关基因的负突变。如果控制产量的基因发生
微生物检验的基本操作技术-微生物的接种、分离
接种1、接种定义接种：将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。 2、接种工具在实验室中，用得多的接种工具是接种环、接种针。有时滴管、吸管也可作为接种工具进行液体接种。在固体培养基表面要将菌液均匀涂布时，需要用到涂布棒。1．接种针 2.接种环 3.接种钩 4.玻璃涂棒 5.接种圈 6.接种锄 7.小解剖刀 3、微生物检验常见接种方法（1）划线接种法 平板划线分离法-
微生物检验的基本操作技术-微生物的培养方法
微生物的生长，除了受本身的遗传特性决定外，还受到许多外界因素的影响，如营养物浓度、温度、水分、氧气、pＨ等。微生物的种类不同，培养的方式和条件也不尽相同。通常分为： 1、一般培养法（需氧培养） 培养温度：25~37℃ 。2、厌氧培养方法①简易的厌氧培养法：A、庖肉培养法B、铁丝圈厌氧培养法C、焦性没食子酸法②厌氧罐法③厌氧手套箱法 厌氧缸法：厌氧缸是普通的干燥缸，用物理化学的方法使缸内造成厌
微生物检验的基本操作技术-无菌操作
1、定义 是指在执行实验过程中，防止微生物侵入机体和保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作技术和管理方法；无菌操作技术是微生物实验的基本技术，是保证微生物实验准确和顺利完成的重要环节。 2、内容无菌操作技术主要包括两方面：1）创造无菌的培养环境。包括提供密闭的培养容器、培养容器的灭菌、培养基的灭菌等；2）在操作和培养过程中防止其它微生物的侵入的措施。包括紫外线杀菌、甲醛熏蒸、超净台的消毒与检测、操作
微生物检测培养基制备细节
称取用准确度1/100的电子天平称取培养基所需药品。先根据配方计算出配制定量培养基所需各种成分药品的量，然后用天平准确称取。称量时用称量纸折叠成簸箕状盛放药品。溶化培养基放入烧杯或搪瓷缸中，慢慢加入少量所需水，边加入边用玻棒搅拌。如果培养基中不含有琼脂，培养基不需要加热；如果含有琼脂，则需要用本生灯或电磁炉加热煮沸，溶解后，再补齐所需水，并搅拌均匀（如图3所示）。如果配制的培养基量很大，可用不锈钢
微生物检验方法-微生物计数法
1、血球计数板法:这种方法简便，直观，快捷，但只适宜于单细胞状态的微生物或丝状微生物所产生的孢子进行计数，并且所得结果是包括死细胞在内的总菌数。 2、染色计数法：为了弥补一些微生物在油镜下不易观察计数，而直接用血球计数板法又无法区分死细胞和活细胞的不足，人们发明了染色计数法。 3、比例计数法：将已知颗粒（如霉菌孢子或红细胞）浓度的液体与待测细胞浓度的菌液按比例均匀混合，在显微镜视野中数出各自的数目
微生物检验方法-生长量测定法
1、体积测量法：又称测菌丝浓度法。原理：通过测定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。 菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。这种方法比较粗放，简便，快速，但需要设定一致的处理条件，否则偏差很大，由于离心沉淀物中夹杂有一些固体营养物，结果会有偏差。 2、称干重法：原理：利用离心或过滤法测定。一般干重为湿重的10-20%。称干重方法较为烦琐，通常获取的微生物产品
微生物检验方法-生理指标法
微生物的生长伴随着一系列生理指标发生变化，例如酸碱度，发酵液中的含氮量，含糖量，产气量等，与生长量相平行的生理指标很多，它们可作为生长测定的相对值。 1、测定含氮量：大多数细菌的含氮量为干重的12.5%，酵母为7.5%，霉菌为6.0%。根据含氮量×6.25，即可测定粗蛋白的含量。含氮量的测定方法有很多，如用硫酸，过氯酸，碘酸，磷酸等消化法和Dumas测氮气法。 2、测定含碳量：将少量（干重0.2-
微生物检验方法-商业化快速微生物检验法
微生物的检测，其发展方向是快速，准确，简便，自动化，当前很多生物制品公司利用传统微生物检测原理，结合不同的检测方法，设计了形式各异的微生物检测仪器设备，正逐步广泛应用于医学微生物检测和科学研究领域。 在微生物检验操作过程中，要保证检测环境（如超净台、检测室）以及所用工器具的洁净程度，同时保证人员各种操作的规范性，尽量保证其无菌性，防止因人为原因操作失误而出现误差结果，同时在适宜温度进行培养，为合
微生物实验操作中常见注意事项汇总
微生物实验容易被污染，所以，对实验环境、设备和人员都需要很高的要求。在实验过程中需要注意的事项也很多。一、无菌操作要求 1. 接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。 2. 进行接种食品样品时，须穿规定的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间， 工作前经紫外线消毒后使用。 3. 接种食品样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球将手擦干净。 4. 进行接种所用的
哈茨木霉大显身手-防治生姜土传病
一、关于哈茨木霉菌木霉菌是自然界广泛分布的真菌，是土壤微生物的重要群落，自1932年，Windling 初次发现木霉菌对植物病原真菌有拮抗作用，木霉菌便开始受到关注，后被广泛运用于农业生产之中。 显微镜下的木霉菌木霉菌属于半知菌类的丝孢纲丛梗孢目丛梗孢科，地球上已知的大概有80多种木霉菌，能够快速产生孢子，可以市场化的主要有哈茨木霉、深绿木霉、长枝木霉菌、短密木霉等。二、哈茨木霉菌防治生姜土传病害
平板接种的步骤
平板划线平板划线的操作是为了将菌稀释从而获得纯培养的单菌落。划线有多种方式。 1.三区平板划线。三区划线中一区所占的区域大约是平板面积的五分之一到四分之一。二区搭过一区的面积使微生物数量得到“稀释”，三区搭过二区的面积使微生物数量进一步“稀释”，三区不可与一区有重叠的划线。一般适用于可疑菌落的分离，或可疑菌落的二次平板分离。通常划完三区后就可以出现单菌落。三区划线如下图。 2.四区平板划线。四区